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牛奶中β-內(nèi)酰胺酶檢測方法

閱讀:243      發(fā)布時間:2019-6-3
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“無抗奶”,顧名思義,即不含抗生素的牛奶。早在2002年,這一概念便被提出,“無抗生素”的字樣也登上了乳品包裝。

為何牛奶含抗生素?

牛奶中的抗生素來自乳牛,乳牛被注射抗生素,主要是治療乳腺發(fā)炎。乳腺炎是奶牛常見病,抗生素的使用是業(yè)內(nèi)“公開的秘密”。牛奶中的抗生素可能導(dǎo)致飲用者過敏,或因長期接觸抗生素而耐藥。

如何做到“無抗”?

  藥品合理間隔期后才擠奶,可以生產(chǎn)無抗奶,可以通過檢驗(yàn)抗生素的方式驗(yàn)證。

1、間接法

方法原理:利用β-內(nèi)酰胺酶能夠酶解青霉素的原理,向牛奶中添加一定量的青霉素,如果牛奶中存在一定濃度的β-內(nèi)酰胺酶,那么青霉素經(jīng)β-內(nèi)酰胺酶酶解后濃度會減少,從而判斷牛奶中是否存在β-內(nèi)酰胺酶。

實(shí)驗(yàn)步驟:稱取20 g試樣,在4℃、16000rpm條件下離心10 min。取下層清液10 g于50 mL塑料離心管,并將塑料離心管置于37℃水浴鍋中振蕩孵育30 min。向孵育后的離心管中加入無水乙醇15 mL。振蕩提取30 min后離心,將上層清液過濾紙后收集于梨形瓶中。減壓濃縮蒸發(fā)掉乙醇。向旋蒸后的梨形瓶中加入10 mL磷酸鹽緩沖液(pH=8.5),渦旋1 min后調(diào)節(jié)pH為8.5。以1 mL/min的速度將提取液通過經(jīng)過預(yù)處理的Oasis HLB固相萃取柱,用2 mL磷酸緩沖液(pH=8.5)淋洗萃取柱,再用2 mL水淋洗。后用3 mL乙腈洗脫。將洗脫液在40℃下氮?dú)獯蹈桑?.025 M磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)定容殘?jiān)? mL,待上機(jī)測定。

色譜條件:LabAlliance PC-2000液相色譜配500型紫外檢測器;

          lanbo色譜柱 :C18(4.6mm×150mm×5μm);

          流動相: 甲醇/0.004M 磷酸二氫鉀(pH=4.5)=40/60;

          檢測波長: 268 nm

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