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一、目的要求

1、了解細(xì)菌染色的基本原理。

2、掌握細(xì)菌的簡單染、革蘭氏染色及其他染色方法。

3、觀察和識別細(xì)菌的形態(tài)及細(xì)菌細(xì)胞的特殊結(jié)構(gòu)。

二、實驗說明

細(xì)菌菌體微小、而且折光率低，在顯微鏡下特別是在油浸物鏡下幾乎與背景無反差，很難看清楚，如將其染色，使折光率增大，便容易觀察。由于菌體的性質(zhì)及各部分對某些染料的著色性不同，因此可以利用不同的染色方法來區(qū)別不同的細(xì)菌及其結(jié)構(gòu)。

用于細(xì)菌染色的染色劑是苯環(huán)上含有發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)的化合物。發(fā)色基團(tuán)使化合物本身具有染色之能力，助色基團(tuán)有電離特性，可以于被染物結(jié)合，使被染物著色。

染色劑有三種：酸性染色劑（電離后分子帶負(fù)電荷）；堿性染色劑（電離后分子帶電荷）；復(fù)合染色劑（在電離后分子不帶電荷，故也稱為中性染色劑）。酸性染色劑主要用于染細(xì)胞質(zhì)；堿性染色劑主要用于染核和異染顆粒等細(xì)胞結(jié)構(gòu)；復(fù)合染色劑主要用來染螺旋體和立克次氏體。

三、實驗材料

1、顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙。 2、酒精燈、接種環(huán)、載玻片。

3、石炭酸復(fù)紅染色液、革蘭氏染色液、莢膜染色液、鞭毛染色液（配方見附錄）。

四、方法步驟 （一）簡單染色法

步驟：涂片 → 干燥 → 固定 → 染色 → 水洗 → 干燥 鏡檢。

1、涂片 在干凈的載玻片*加一滴蒸餾水，以無菌操作法，從斜面上挑取少量菌種，在載玻片上和水混合后，涂成一均勻薄層。

2、干燥固定 涂片讓其在空氣中自然干燥，有時為使其干燥得快點，也可放入鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)。

3、固定 待涂片干燥徨，手持載玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精燈火焰上通過幾次（用手背觸載玻片背面，以不燙手為宜），待冷卻后，再加染料。

4、染色 玻片置于水平位置。加石炭酸復(fù)紅液于菌膜部位。染1-2min。

5、水洗 傾去染液，斜置玻片，用很細(xì)水流的自來水沖洗（切勿使水流直接沖刷在菌膜處），直至洗下水呈無色為止。

6、干燥自然干燥或用鼓風(fēng)干燥箱烘干。

7、鏡檢。