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CCK8 細(xì)胞毒性實驗檢測 SRM1649b 對皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響

      已有研究表明 PAHs 可以破壞皮膚角質(zhì)層及緊密連接，皮膚屏障受損是皮膚敏感 患者的發(fā)病的主要病因，然而 PAHs 是否作用于皮膚細(xì)胞的衰老和老化至今仍不清 楚。為此，下面采用了一種成分為 SRM1649b 的 PAHs 標(biāo)準(zhǔn)品來刺激皮膚角質(zhì)細(xì)胞和皮膚成纖維細(xì)胞，首先觀察在 SRM1649b 刺激下，這些皮膚細(xì)胞是否出現(xiàn)老化現(xiàn)象。 通過不同濃度，以及不同處理時間的 SRM1649b 刺激，HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞均出現(xiàn) 增殖能力減弱的現(xiàn)象，并且與刺激濃度與時間呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)（p＜0.05）。而增殖 能力減弱正是細(xì)胞出現(xiàn)衰老的首要表型之一。這部分研究結(jié)果提示 SRM 1649b 城市塵埃 潛在調(diào)控皮膚細(xì)胞衰老。

SRM1649b 對皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及皮膚成纖維細(xì)胞周期的影響  

      通過 CCK8 實驗檢測發(fā)現(xiàn)，SRM1649b 處理時，HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞均出現(xiàn)增 殖能力減弱的衰老表型。為進(jìn)一步證實這個現(xiàn)象，在接下來檢測在不同濃度的 SRM1649b 刺激下，HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞的細(xì)胞周期是否出現(xiàn)變化。實驗結(jié)果顯示 HaCaT 在 SRM1649b 刺激時，隨著刺激濃度的加大，細(xì)胞周期明顯阻滯在 G1/S 期。 同樣為了進(jìn)一步證實細(xì)胞被阻滯在 G1/S 期，我們檢測了 G1 期向 S 期轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵調(diào) 控分子，Cyclin A 以及 Skp2 的表達(dá)量。結(jié)果一致顯示，隨著刺激濃度的加大，這兩 個分子的表達(dá)受到了極大的抑制。而用 SRM1649b 刺激 NHDF 細(xì)胞時，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周 期不同程度的被阻滯在 G1/S 期，提示 SRM1649b 多個作用途徑的導(dǎo)致皮膚細(xì)胞阻滯。 這些結(jié)果進(jìn)一步提示 SRM 1649b 城市塵埃刺激下，皮膚細(xì)胞通過細(xì)胞周期的阻滯來導(dǎo)致增殖 減弱。

SRM1649b 對皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及皮膚成纖維細(xì)胞凋亡的影響

       除了 SRM 1649b 城市塵埃等 PAHs 能導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力減弱，細(xì)胞周期阻滯以外。最重 要的一個方面是，它能破壞被處理的細(xì)胞 DNA 損傷修復(fù)系統(tǒng)，使細(xì)胞積累大量的 DNA 損傷，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡，或者惡性突變。這也是皮膚細(xì)胞接受這些刺激時發(fā) 生病變的最主要因素。為此，在接下來利用凋亡檢測實驗檢測 SRM1649b 刺激時， 皮膚細(xì)胞的死亡是否增加？結(jié)果同樣顯示：隨著 SRM1649b 刺激濃度的增大，HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞均出現(xiàn)了大量的凋亡。

總結(jié)：SRM1649b 刺激時，HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞均體現(xiàn)出顯著的衰老表型，即 增殖能力減弱，細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡增加。以上三部分實驗結(jié)果證實 SRM 1649b 城市塵埃能顯著導(dǎo)致皮膚細(xì)胞衰老。

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