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定量蛋白質(zhì)組學(xué)

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iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué):iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技術(shù)是由美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司ABI 研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4種或8種同位素編碼的標(biāo)簽,通過特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán),爾后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質(zhì)的相對含量或含量。

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iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué):iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技術(shù)是由美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司ABI 研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4種或8種同位素編碼的標(biāo)簽,通過特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán),爾后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質(zhì)的相對含量或含量。

iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ和tmt的技術(shù)原理*一樣,所不同的是二者的分子結(jié)構(gòu)有差異。與SILAC相比(標(biāo)記蛋白質(zhì)),iTRAQ和TMT是對肽段進(jìn)行標(biāo)記的。依據(jù)iTRAQ/TMT標(biāo)簽的質(zhì)量數(shù)差異,通過MS實現(xiàn)對多組樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量:

SILAC是通過一級MS( MSl)對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量,而iTRAQ/TMT是通過二級MS( MS/MS.MS2)進(jìn)行定量的iTRAQ/TMT幾乎能兼容所有來源的蛋白質(zhì)樣品,并且能同時分析多達(dá)8-10組的樣品,分析通量高。

iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)

1、分別提取蛋白質(zhì)并定量;
2、Trypsin分別對蛋白進(jìn)行酶解,提取肽段;
3、用不同質(zhì)量數(shù)的iTRAQ/TMT標(biāo)簽分別對肽段樣品進(jìn)行標(biāo)記:
4、標(biāo)記完成后,混合樣品,用SCX進(jìn)行組分分離(15-20組分);
5、對每個組分進(jìn)行LC-MS分析:
6、蛋白質(zhì)鑒定與定量分析,篩選差異表達(dá)的蛋白;
7、生物學(xué)實驗驗證(Western blot,EUSA等):

iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢
1、高通量,能同時進(jìn)行多達(dá)8-10組樣品蛋白質(zhì)組的定性與定量分析; 
2、幾乎兼容所有來源的樣品(動植物組織、細(xì)菌、血液等); 
3、實驗周期短。  

iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)

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