大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit上海素爾生物為您傾情供應(yīng),**技術(shù),嚴(yán)格工藝流程,*抗體/抗原,嚴(yán)格QC檢測(cè)后方可出庫(kù),請(qǐng)放心購(gòu)買!致電:,!
中文名稱:大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit
英文名稱:Rat Anti-thyroid-globulin antibody,ATGA/TGAB ELISA KIT
規(guī)格:48T/96T
儲(chǔ)存溫度::-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))
有效期:6個(gè)月
產(chǎn)品供應(yīng)商:上海素爾生物科技有限公司
1-2個(gè)工作日發(fā)貨,提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),收到標(biāo)本起一周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)和zui終數(shù)據(jù)
ELISA各種樣本收集、處理、保存方法
1. 血清標(biāo)本收集、處理、保存方法:
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,全血標(biāo)本室溫放置1-2 h或4℃過夜,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
2. 血漿標(biāo)本收集、處理、保存方法:
根據(jù)樣本要求選擇EDTA或*或枸緣酸鈉作為抗凝劑,用含抗凝劑的*或離心管采集血液標(biāo)本,室溫混合20 min左右,然后4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清即為血漿。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
3. 尿液標(biāo)本收集、處理、保存方法:
用干凈容器收集尿液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
4. 唾液標(biāo)本收集、處理、保存方法:
用干凈離心管收集唾液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
5. 細(xì)胞標(biāo)本收集、處理、保存方法:
(1)細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到干凈離心管中,4℃、3000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
- 細(xì)胞裂解液
收集細(xì)胞培養(yǎng)液,4℃、3000 rpm/min離心20 min,棄去上清,用預(yù)冷的PBS(0.01M,PH 7.4)洗滌三次。加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞充分裂解。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,除去細(xì)胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
6. 植物標(biāo)本收集、處理、保存方法:
取適量大小組織塊(一般0.2-0.5 g),用預(yù)冷的PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)漂洗三次,濾紙拭干水分。準(zhǔn)確稱重,放入勻漿管中,加入4倍體積的勻漿介質(zhì)(0.05 mol/L Tris-HCl,pH 7.4 PBS緩沖液)于勻漿管中,冰水浴條件下,剪碎組織塊,手工勻漿或機(jī)器勻漿,制成勻漿液。4℃、10000 rpm/min離心20 min,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
7. 糞便標(biāo)本收集、處理、保存方法:
采集時(shí)用干凈的竹簽挑取糞便樣本到離心管中,向離心管中加入適量PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4),攪拌均勻。然后4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
8. 組織標(biāo)本收集、處理、保存方法:
將組織樣本用PBS緩沖液(0.01M,PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。將組織塊稱重,記錄后剪碎(碎塊盡量?。?。將組織按一定的比例(通常組織重量:PBS體積=1:9)加入預(yù)冷的PBS緩沖液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)中勻漿,勻漿時(shí)置于冰上。吸取勻漿液到離心管中,4℃、10000 rpm/min離心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長(zhǎng)時(shí)間),避免反復(fù)凍融。
大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit
1.E大鼠二氨氧化酶(DAO)ELISA試劑盒LISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完, 板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
試劑盒靈敏度、精密度、穩(wěn)定性
1. 靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;2)為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力。
2. 特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。其越高說明特異性越好。
3. 精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍
4. 穩(wěn)定性:試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間,一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存,定期測(cè)定其靈敏度,特異性和精密度等指標(biāo),直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止,通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。
5. 簡(jiǎn)便性:指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下,實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好,在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡(jiǎn)單明了,定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡(jiǎn)單。
6. 安全性:指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
7. 經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。
試劑評(píng)價(jià):需要有的確證方法確證的樣品進(jìn)行檢測(cè),一般實(shí)驗(yàn)室不易取得此類樣品,每新購(gòu)進(jìn)一次試劑評(píng)價(jià)也很麻煩??梢酝ㄟ^間接的回收實(shí)驗(yàn)對(duì)試劑進(jìn)行選擇
ELISA試劑盒常見問題及分析
問題分析
若試驗(yàn)效果不好,請(qǐng)及時(shí)對(duì)顯色結(jié)果拍照,保留未用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后我公司為你解決問題。同時(shí)您也可以參考以下資料:
問題描述 | 可能原因 | 相應(yīng)對(duì)策 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差 | 吸液或加液不準(zhǔn) | 檢查移液器及吸頭 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確 | 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),反復(fù)吹打,確保*混勻 |
洗滌不* | 保證洗滌時(shí)間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量 |
顯色很弱或無色 | 孵育時(shí)間太短 | 保證充足的孵育時(shí)間 |
實(shí)驗(yàn)溫度不正確 | 使用*的實(shí)驗(yàn)溫度 |
試劑提及不夠或漏加 | 檢查洗液及加液過程,保證所有試劑按順序足量添加 |
稀釋不正確 |
讀數(shù)數(shù)值低 | 酶標(biāo)儀設(shè)置不正確 | 在酶標(biāo)儀上檢查波長(zhǎng)及濾光片設(shè)置 |
提前打開酶標(biāo)儀預(yù)熱 |
變異系數(shù)大 | 加液不正確 | 檢查加液情況 |
背景值高 | 檢測(cè)抗體的工作濃度 | 使用*的稀釋倍數(shù) |
酶標(biāo)板洗滌不* | 重新閱讀操作手冊(cè),保證清洗*;如果用自動(dòng)洗板機(jī),請(qǐng)檢查所有的出口是否有堵塞 |
洗液有污染 | 配置新鮮的洗液 |
靈敏度低 | ELISA試劑盒保存 | 按照說明書要求保存相關(guān)試劑 |
讀數(shù)前未終止 | OD讀數(shù)前應(yīng)在每孔中加入終止液 |
大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit價(jià)格/說明書 高品質(zhì)產(chǎn)品:
DRE20122 大鼠血糖ELISA試劑盒
DRE20123 大鼠白細(xì)胞介素17(IL-17) ELISA試劑盒
DRE20124 大鼠白細(xì)胞介素23(IL-23)ELISA試劑盒
DRE20125 大鼠胰淀素(Amylin) ELISA試劑盒
DRE20127 大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1) ELISA試劑盒
DRE20128 大鼠5羥色胺(5-HT) ELISA試劑盒
DRE20129 大鼠可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(sFlt) ELISA試劑盒
DRE20130 大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) ELISA試劑盒
DRE20131 大鼠防御素5(D-5) ELISA試劑盒
DRE20132 大鼠5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒
DRE20133 大鼠過氧化脂質(zhì)(LPO) ELISA試劑盒
DRE20134 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)ELISA試劑盒
DRE20135 大鼠磷脂酶C (PLC) ELISA試劑盒
DRE20136 大鼠嗜鉻蛋白A(CgA) ELISA試劑盒
DRE20137 大鼠蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒
DRE20138 大鼠白細(xì)胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒
DRE20139 大鼠促黃體激素(LH) ELISA試劑盒
DRE20140 大鼠*(cAMP) ELISA試劑盒
DRE20141 大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF) ELISA試劑盒
DRE20142 大鼠總*(TC)ELISA試劑盒
DRE20143 大鼠孕酮(P) ELISA試劑盒
DRE20144 大鼠叉頭蛋白P3(FOXP3)ELISA試劑盒
*個(gè)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會(huì)在試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200µl。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會(huì)建議使用300µl洗滌液進(jìn)行洗滌,以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來說,洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
第二個(gè)影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度,使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對(duì)于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過,有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序,分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其實(shí)很簡(jiǎn)單,就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會(huì)溢出到其他孔中。
另外,還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景(殘留量)和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之,如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會(huì)使吸液效率降低,殘留量增加。目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭:剛性和浮動(dòng)。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動(dòng),而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢谩J褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜,因?yàn)槟阈枰浅W屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板,那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí),吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要,因此洗頭會(huì)下降到底部。抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響;如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)(這很常見,因?yàn)楦欤?,那么抽吸的位置需要?yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀,但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間,即使這是所有洗頭zui常見的默認(rèn)位置。一般來說,*位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。如果沒有自動(dòng)洗板機(jī),采用手工洗滌,那么也需要注意幾點(diǎn)。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法進(jìn)行洗滌;不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時(shí)需保證微孔板平放,將洗滌液注滿各孔,但盡量避免漏液溢液,以每孔300 µl為宜;板洗次數(shù)一般為3次,要保證洗板的浸泡時(shí)間,每次浸泡時(shí)間一般為30-60 秒;盡量減少洗液殘留量,*每次洗板后進(jìn)行拍板,并及時(shí)更換吸水紙,避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。
大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit看起來很簡(jiǎn)單,但是在實(shí)際操作過程中,也不能掉以輕心,還是應(yīng)該仔細(xì)檢查洗滌步驟,才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。