LTD4 ELISA Kit白三烯D4(LTD4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
用途
該試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然及部分重組LTD4濃度。
LTD4 ELISA Kit白三烯D4(LTD4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 檢測(cè)原理
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。用LTD4抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的LTD4與包被的LTD4競(jìng)爭(zhēng)*標(biāo)記的抗LTD4單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，*與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，LTD4濃度與OD450值之間呈反比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中LTD4的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 競(jìng)爭(zhēng)法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時(shí)間 | 2.5h |
| 反應(yīng)性 | 通用 |
| 檢測(cè)方法 | Colormetric |
| 檢測(cè)范圍 | 0.31-20 ng/mL |
| 靈敏度 | 0.19 ng/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測(cè)樣本中的LTD4，且與其它相關(guān)蛋白無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
LTD4 ELISA Kit白三烯D4(LTD4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (ng/mL) | O.D | Average |
|---|
| 20 | 0.373
0.431 | 0.402 |
| 10 | 0.5
0.55 | 0.525 |
| 5 | 0.751
0.741 | 0.746 |
| 2.5 | 1.097
1.097 | 1.097 |
| 1.25 | 1.559
1.549 | 1.554 |
| 0.63 | 2.02
2 | 2.01 |
| 0.31 | 2.371
2.383 | 2.377 |
| 0 | 2.849
2.867 | 2.858 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測(cè)20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測(cè)20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(ng/mL) | 1.00 | 2.90 | 9.30 | 1.00 | 2.70 | 10.20 |
| Standard deviation | 0.10 | 0.20 | 0.30 | 0.10 | 0.10 | 0.40 |
| C V (%) | 10.00 | 6.90 | 3.23 | 10.00 | 3.70 | 3.92 |
回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=5) | 86-97 | 92 |
| EDTA plasma (n=5) | 86-100 | 93 |
| Cell culture media (n=5) | 84-99 | 90 |
線性
分別往5個(gè)樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個(gè)樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 89-104 | 87-101 | 93-107 |
| Average (%) | 96 | 92 | 99 |
| 1:4 | Range (%) | 88-101 | 89-103 | 104 |
| Average (%) | 94 | 94 | 104 |
| 1:8 | Range (%) | 92-107 | 89-103 | 94-107 |
| Average (%) | 97 | 96 | 99 |
| 1:16 | Range (%) | 91-102 | 89-101 | 97-110 |
| Average (%) | 96 | 94 | 103 |
試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在4℃保存一周；如果一周以后才使用試劑盒，請(qǐng)拆開(kāi)試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
| 中文名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
|---|
| ELISA酶標(biāo)板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 條 | -20℃，可存放6個(gè)月 |
| 凍干標(biāo)準(zhǔn)品 | Reference Standard | 2支 |
| 濃縮*化抗體(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL |
| 濃縮HRP酶結(jié)合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6個(gè)月 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 4℃.可存放6個(gè)月 |
| *化抗體稀釋液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL |
| 酶結(jié)合物稀釋液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL |
| 濃縮洗滌液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL |
| 底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 4℃(避光) |
| 反應(yīng)終止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 4℃ |
| 封板覆膜 | Plate Sealer | 5 張 | |
| 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) | Product Description | 1 份 |
| 質(zhì)檢報(bào)告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
說(shuō)明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。
試劑體積以實(shí)際發(fā)貨版說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。相關(guān)試劑在分裝時(shí)會(huì)比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請(qǐng)?jiān)谑褂脮r(shí)量取而非直接倒出。
試驗(yàn)所需自備物品
- 1.酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)
- 2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
- 3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
- 4.吸水紙
操作步驟
