隨著我國(guó)飼料工業(yè)的發(fā)展，魚粉的需要量逐年增加，魚粉的質(zhì)量問題越來越引起飼料行業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的重視。魚粉是水產(chǎn)飼料的主要蛋白源，尤其含有動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的氨基酸，由于魚粉用量大，價(jià)格高，有些廠家摻雜使假、以次充好，使魚粉質(zhì)量參差不齊，這一行為業(yè)給魚粉品質(zhì)分析帶來了一定困難。因此，有必要建立一個(gè)有效的手段對(duì)魚粉中氨基酸進(jìn)行定量分析。
以下是譜祥利用LC高效液相色譜儀對(duì)魚粉進(jìn)行的HPLC檢測(cè)方案。
1、儀器與試劑
1.1儀器、設(shè)備
高效液相色譜儀
SMA 色譜柱AA：250mm×4.6mm×5μm
分析天平
恒溫箱，溫度控制在110±1℃
微量進(jìn)樣器，（20μL）一支
漩渦混勻器
氮吹儀
針頭過濾器
微孔濾膜：0.45µm
1.2試劑
鹽酸溶液，6mol/L:將優(yōu)級(jí)純鹽酸與水按1:1(V/V)混合。
氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
乙腈，色譜純。
三水合醋酸鈉，優(yōu)級(jí)純。
冰醋酸。
正己烷，色譜純。
2、供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備
對(duì)照品溶液的制備 取氨基酸混合工作標(biāo)液500ul，用水稀釋至5ml，即得。
供試品溶液的制備 稱取試樣50-100mg（準(zhǔn)確至0.1mg）于據(jù)塞試管中，加入6.0mol/l鹽酸10ml，混勻，充分提取10min，蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中，水解22-24h。冷卻后充分混勻，過濾。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求移取適量上清液，60℃下氮?dú)獯蹈桑瑐溆?。以下按照衍生方法包進(jìn)行。
方法包衍生方法：將恒溫水浴鍋預(yù)熱至50±1℃，分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來濃度的1/5倍。精密量取上述對(duì)照品1ml，至于試管中，加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml，搖勻；在50±1℃的水浴中加熱45分鐘，取出，加入正己烷溶液1ml，振搖；并用孔徑為0.45μm有機(jī)膜過濾，放置30min后，取澄清的下層液進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)。供試品的衍生步驟與對(duì)照品相同。
3、色譜條件
色譜柱：AA 4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm
流動(dòng)相：
流動(dòng)相A：0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH6.5）：乙腈=93:7
配置方法：準(zhǔn)確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中，攪拌均勻，溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5； 準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml，混合均與，抽濾，過0.45μm濾膜。
流動(dòng)相B：水：乙腈=20:80。
配制方法：準(zhǔn)確量取水100ml和乙腈400ml，混合均勻，抽濾，過0.45μm濾膜。
波長(zhǎng)：254nm
流速：1. 0 mL/min
梯度設(shè)置：
T（min） | A% | B% |
0.01 | 100.0 | 0.0 |
11 | 93.0 | 7.0 |
13.9 | 88.0 | 12.0 |
14 | 85.0 | 15.0 |
29 | 66.0 | 34.0 |
32 | 30.0 | 70.0 |
35 | 0.0 | 100.0 |
42 | 0.0 | 100.0 |
45 | 100.0 | 0.0 |
60 | 100.0 | 0.0 |
4、測(cè)定法
分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得
如果需要技術(shù)咨詢，請(qǐng)： 劉工
