EZ020細胞及動物組織RNA直擴RT-PCR試劑盒 細胞組織或細胞基因的擴增與克隆、RNA病毒基因的擴增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR.。

PCR前的核酸提取過程操作復(fù)雜，耗時、好禮，難以實現(xiàn)高通量操作，且易造成實驗室氣溶膠污染。本公司給予*的Direct Lysis試劑，開發(fā)了組織細胞直接擴增技術(shù)，可不用提取核酸，對組織或細胞樣本簡單處理后，直接進行PCR、RT-PCR、qPCR以及RT-PCR。該系列試劑盒可廣泛應(yīng)用于基因克隆、轉(zhuǎn)基因或基因敲除鑒定、基因表達分析、病毒診斷等PCR相關(guān)的各種實驗。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

低樣本量：樣品用量小，20-40ul即可滿足需求

快捷：30min內(nèi)制備模板，無需其他設(shè)備

高效：經(jīng)反復(fù)驗證，可有效擴增組織細胞中長達1800bp的DNA和RNA的片段

直接：無需柱純化、步驟簡單，降低氣溶膠產(chǎn)生

高通量：能夠在96孔板或8聯(lián)管中操作

RNA direct：RNA也可進行直接擴增，同類產(chǎn)品少，且對比競品效果優(yōu)

產(chǎn)品名稱：EZ020細胞及動物組織RNA直擴RT-PCR試劑盒

英文名稱：EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit（One Step)

產(chǎn)品貨號：EZ020-01/EZ020-02

產(chǎn)品規(guī)格：30T/100T

產(chǎn)品報價：1200元/3000元

試劑盒應(yīng)用：細胞組織或細胞基因的擴增與克隆、RNA病毒基因的擴增、RNA病毒PCR診斷、RNA病毒Real-time PCR.。

試劑盒組成：RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存條件：-20ºC保存。使用前將RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室溫或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用時需置于冰上。

EZ020細胞及動物組織RNA直擴RT-PCR試劑盒使用方法：

細胞中RNA的擴增

（1）將6ul RNA-EZ-1與3ul RNA-EZ-2充分融合。

（2）取20ul細胞懸液（10^5-10^6cells/ml）,加入上述混合液，混勻。

（3）置于37ºC靜置10分鐘。

（4）加入1ul RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于37ºC靜置15分鐘。

（6）置于98ºC加熱5分鐘。

（7）加入60ul的RNA-EZ-4，混勻。

（8）取2ul（7）中處理液進行RT-PCR擴增。

組織塊中RNA的擴增

（1）用 H2O 將 RNA-EZ-1 稀釋 5 倍，每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀釋液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2，混合均勻。同時處理多個組織塊時，可以按照以上比例配制預(yù)混液并分裝到每個離心管 26 µL。

（2）切取半顆米粒大小的組織塊（< 3 mm3），*浸入上述混合液中。

（3）置于 37ºC 靜置 10 分鐘。

（4）加入 1µL RNA-EZ-3，混勻。

（5）置于 37ºC 靜置 15 分鐘。

（6）置于 98ºC 加熱 5 分鐘。

（7）加入 60 μL RNA-EZ-4，混勻。

（8）取 2 μL（7）中處理液進行 RT-PCR 擴增。

Real-Time PCR

取上述細胞或組織處理液，加入特異性引物和 TaqMan 探針，可進行特異性靶標 RNA 的定

量檢測。如需進行 SYBR Green Real-time PCR，請選擇 EZ021-01/-02（EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit（One Step)）。

在 RNase free 的離心管中配制 PCR 反應(yīng)體系

按照以下方法設(shè)定 PCR 反應(yīng)

注意事項

（1）取樣的細胞量應(yīng)當適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應(yīng)當以透明為宜。

（2） 樣品處理過程中應(yīng)當防止交叉污染，*設(shè)置陰性對照參與處理過程，以檢測環(huán)境的污染。

（3）用本產(chǎn)品擴增的 RNA 不宜太長，1000bp 及以內(nèi)的片段佳，前期研究中可擴增長達 1800bp的片段，擴增片段越*率越低。擴增的成功率也與 RNA 的豐度、二級結(jié)構(gòu)以及引物等有關(guān)。

（4）本產(chǎn)品同樣適用于相應(yīng)的細胞或組織中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 診斷。

（5）2×RT-Buffer 中加入了染料和相應(yīng)試劑，可直接進行電泳，無需另加 Loading buffer。

（6）處理 96 孔板中的細胞時，可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制預(yù)混液，使用多道移液器直接加入 96 孔板經(jīng) DPBS 洗滌的細胞中，實現(xiàn)高通量操作。

（7）2×RT-Buffer 中的染料不影響 TaqMan 探針的效果。