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服務(wù)簡(jiǎn)介

Western blot技術(shù)的一般步驟是將經(jīng)過(guò)SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。由于Western blot檢測(cè)技術(shù)結(jié)合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測(cè)定的特異敏感等多種特點(diǎn),因此可檢測(cè)到1-5 ng (低可到10-100 pg)中等大小的靶蛋白。同時(shí),Western blot技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

western blot實(shí)驗(yàn)

應(yīng)用范圍

1、半定量或定性檢測(cè)細(xì)胞或組織中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況;

2、從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì);

3、蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后續(xù)分析,并結(jié)合組分分離技術(shù),檢測(cè)目標(biāo)蛋白的定位情況,為免疫熒光實(shí)驗(yàn)的補(bǔ)充;

4、在后基因組時(shí)代,將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等其他技術(shù)一起相互配合,發(fā)揮更重要的作用。

 

服務(wù)流程

 Western Blot是用抗體檢測(cè)蛋白的重要方法之一。Western Blot的操作步驟主要包括:蛋白樣品收集,電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,一抗孵育,二抗孵育,底物顯色等過(guò)程。


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