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蛋白糖基與糖肽/糖蛋白分析
蛋白糖基與糖肽/糖蛋白分析技術(shù)
■基于傳統(tǒng)2-AB法的GlycoWorks蛋白N-糖樣品凈化包
■130? Glycan柱，分析標記寡糖與糖肽
■300? Glycan柱，分析糖蛋白、亞基及糖肽
■相關(guān)標準品，用于調(diào)校系統(tǒng)與色譜柱
受益于沃特世久負盛名的BEH亞乙基橋雜化顆粒技術(shù)、配體鍵合技術(shù)與色譜柱裝
填技術(shù)，Glycan色譜柱，為蛋白糖基分析提供了高分辨、靈敏、穩(wěn)定、可靠的色譜柱方案，其優(yōu)勢如下：
■色譜柱化學耐受性強，pH 2-11，溫度上限可達90°C
■提供1.7 µm UPLC柱、2.5 µm XP柱、與3.5 µm HPLC柱，適配不同儀器平臺
■填料批次經(jīng)糖基性能測試標準品QC，確保批間一致性
重組人EPO N-聯(lián)糖基化和O-聯(lián)糖基化的全面表征
目的:為EPO分析建立兩種簡易的基于LC的互補方法,分別用于獲取N-糖基化和O-糖基化的相關(guān)信息.方法:借助采用新型糖基標記試劑RapiFluor-MS的樣品制備新策略,快速釋放rhEPO中的N-糖基,對其進行GlycoWorksRapiFluor-MS標記,得到rhEPO的N-糖譜圖,然后利用靈敏的熒光檢測和質(zhì)譜檢測技術(shù)進行親水作用色譜(HILIC)分析.接下來的平行分析中,利用完整蛋白質(zhì)的HILIC分析甄別糖基釋放的rhEPO,以解析O糖基化的相關(guān)信息.結(jié)果:我們沒有采用分析rhEPO游離O-糖的策略,而是開發(fā)了另一種表征策略工作流程,首先使用GlycoWorks Rapid PNGase F和1% RapiGestTM SF表面活性劑對rhEPO進行快速糖基釋放,10分鐘后獲得了一份經(jīng)N-糖基釋放的完整rhEPO樣品,然后采用ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide糖蛋白分析柱通過HILIC分離對其進行分析.結(jié)論:重組人促紅細胞生成素(rhEPO)分子此前由于其糖基化結(jié)構(gòu)相對復雜,一直被視為糖基化表征的難題,我們介紹的兩種簡易策略可用于詳細研究rhEPO的N-聯(lián)糖基化和O-聯(lián)糖基化;充分利用這些工具有助于我們加快新型生物仿制藥的開發(fā).
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