Millipore 15ml 3K超濾離心管具有快速超過(guò)濾功能，能夠達(dá)到較高的濃縮系數(shù)易于從稀釋液和復(fù)雜的樣本組合進(jìn)行濃縮液回收。并能進(jìn)行80倍濃縮。典型的處理時(shí)間為15至40分鐘。豎式設(shè)計(jì)將溶質(zhì)極化和之后造成的濾膜結(jié)垢降至較低，過(guò)濾裝置中的物理止濾點(diǎn)防止過(guò)濾器旋轉(zhuǎn)過(guò)度使樣本干燥和造成樣本損失。濃縮液用移液管從過(guò)濾器的樣本槽中收集，而超過(guò)濾濾出液則收集到所提供的離心管中。該裝置可在擺桶或定角轉(zhuǎn)子中旋轉(zhuǎn)。 Amicon® Ultra-15 10K裝置未經(jīng)消毒，只供一次使用。
使用前的沖洗
Millipore 15ml 3K超濾離心管的超過(guò)濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可在使用之前用緩沖液或Milli-Q®水沖洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。
注意：Amicon®超過(guò)濾裝置中的濾膜一旦潤(rùn)濕后應(yīng)避免重新干燥。若在沖洗后沒(méi)有立即使用該裝置，則讓液體保留在濾膜上，直到使用該裝置為止。
如何使用Amicon® Ultra-15離心過(guò)濾器
1. 向Amicon® Ultra超過(guò)濾裝置加入不超過(guò)15 mL的樣本(如果使用定角轉(zhuǎn)子則為12 mL)。
2. 將蓋好蓋子的過(guò)濾裝置放入離心轉(zhuǎn)子中，用一個(gè)類似的裝置抵住。
3. 當(dāng)使用擺桶轉(zhuǎn)子時(shí)，以至大4,000 × g旋轉(zhuǎn)約15–40分鐘。
當(dāng)使用定角轉(zhuǎn)子時(shí)，裝置的方向要使濾膜面板朝上，以至大5,000 × g旋轉(zhuǎn)約15–40分鐘。
說(shuō)明： 關(guān)于典型旋轉(zhuǎn)時(shí)間，請(qǐng)參見(jiàn)圖1和表1。
4. 如要回收濃縮后的溶質(zhì)，在過(guò)濾裝置底部插入一個(gè)移液管，然后左右搖擺著吸取樣本，以確保*回收。 超濾液可以保存在離心管中。
說(shuō)明： 要想達(dá)到理想回收，離心后請(qǐng)立即取走濃縮后樣本。
除鹽或滲濾
除鹽、更換緩沖液或滲濾是去除含有生物分子的溶液中的鹽分或溶劑的重要方法。 可以在Amicon® Ultra-15裝置中，通過(guò)濃縮樣本、然后向濃縮液加入任何所需溶劑復(fù)原至樣本原始體積的方式，去除鹽分或更換緩沖液。可重復(fù)“洗出”過(guò)程，直到污染微溶質(zhì)的濃度充分降低為止。
影響流速的因素包括樣本的濃度、起始體積、溶質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)、相對(duì)離心力、離心轉(zhuǎn)子的角度、濾膜類型以及溫度。圖1和表1可用來(lái)估計(jì)達(dá)到給定的濾出液體積或濃度所需的時(shí)間。15 mL樣本旋轉(zhuǎn)時(shí)間一般約需15至40分鐘。盡管大部分樣本在離心過(guò)程的前15至30分鐘濾過(guò)，但一般在旋轉(zhuǎn)15至40分鐘之后才能達(dá)到較低濃縮液體積(100–150 μL)。
蛋白質(zhì)截留率和濃縮液回收率
Amicon®超過(guò)濾裝置濾膜的特征由截留分子量(MWCO)描述，即它們截留超過(guò)一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶質(zhì)可能只有部分被截留。濾膜的截留率取決于溶質(zhì)的分子大小和形狀。在大多數(shù)應(yīng)用中，分子量是用來(lái)評(píng)估截留特性的一個(gè)方便的參數(shù)。為了獲得較佳結(jié)果，請(qǐng)使用MWCO至少比要濃縮的蛋白質(zhì)溶質(zhì)分子量小兩倍的濾膜。
至大化樣品回收率
濃縮液中的樣本回收量低可能由于吸附損失、過(guò)度濃縮、或者樣本穿過(guò)濾膜造成。
● 吸附損失取決于溶質(zhì)濃度、其疏水性、溫度、與過(guò)濾裝置表面的接觸時(shí)間、樣本成分及pH值。為降低損失，離心后請(qǐng)立即取走濃縮后樣本。
● 如果樣本起始濃度高，請(qǐng)監(jiān)視離心過(guò)程，以免使樣本過(guò)度濃縮。過(guò)度濃縮可導(dǎo)致沉淀和樣本損失。
● 如果樣本看起來(lái)滲過(guò)了濾膜，請(qǐng)選用較低MWCO的Amicon® Ultra-15裝置。
