TRIS-EDTA Antigen Retrieval Solution (50×) pH8.0
TRIS-EDTA抗原修復(fù)液(50×)pH8.0
產(chǎn)品簡介:
EDTA抗原修復(fù)液是一種常用的抗原修復(fù)液,可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。
細(xì)胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后,組織中的許多氨基酸殘基形成醛鍵、羧甲鍵而封閉了部分抗原決定簇,同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)也使抗原決定簇隱蔽。導(dǎo)致免疫染色時(shí)染色信號減弱,甚至出現(xiàn)一些假陽性染色結(jié)果。因此,對于石蠟切片,要求在進(jìn)行IHC染色前,*行抗原修復(fù),即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞,恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。EDTA緩沖液是除檸檬酸緩沖液外另一種常用的IHC抗原修復(fù)液。有部分抗原用EDTA緩沖液修復(fù)效果好于檸檬酸緩沖液。特別是對于某些核抗原效果會更明顯。
本抗原修復(fù)液采用了廣泛使用的EDTA,可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián),充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。通常石蠟切片都需進(jìn)行抗原修復(fù)處理,而冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)處理??乖迯?fù)會大大改善石蠟切片的免疫染色效果,但對于冰凍切片的染色效果很多文獻(xiàn)資料表明也有顯著改善。特別是當(dāng)冰凍切片免疫染色效果欠佳時(shí),可以考慮嘗試進(jìn)行抗原修復(fù)。從原理上來看,無論冰凍切片還是細(xì)胞爬片等,只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品,進(jìn)行抗原修復(fù)都會有效去除蛋白之間的交聯(lián),充分暴露抗原表位,從而大大改善免疫染色效果。
本產(chǎn)品可以配制成5000ml抗原修復(fù)液(1×)。按照每個(gè)玻片需要10ml抗原修復(fù)液(1×)計(jì)算,本產(chǎn)品可用于500個(gè)樣本的抗原修復(fù)。
使用方法(參考):
一.石蠟切片
A脫蠟:
(1)浸泡在二甲苯中3次,每次3~5min,每次更換新的二甲苯。
(2)無水乙醇脫水2次,每次3~5min。
(3)95%乙醇3-5min。
(4)90%乙醇3-5min。
(5)70%乙醇3-5min。
(6)餾水沖洗兩次,每次3~5min。
B抗原修復(fù):
(1)用去離子水或雙蒸水稀釋TRIS-EDTA抗原修復(fù)液(50×)至1×,例如1ml TRIS-EDTA抗原修復(fù)液(50×)加入49ml去離子水,混合均勻,即可得1× TRIS-EDTA抗原修復(fù)液。
(2)抗原修復(fù)液(1×)使用前需預(yù)熱至95℃。
(3)將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1×)中,95-100ºC加熱約20分鐘。
C冷卻至室溫后,免疫染色洗滌液洗滌1~2次,每次3~5分鐘。
D進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
二.冰凍切片
(1)用去離子水或雙蒸水稀釋TRIS-EDTA抗原修復(fù)液(50×)至1×。
(2)免疫染色洗滌液洗滌切片3~5分鐘。
(3)將切片浸泡在抗原修復(fù)液(1×)中,95℃或沸水加熱約20分鐘。
(4)抗原修復(fù)液(1×)使用前預(yù)熱至95-100℃。
(5)冷卻至室溫后,免疫染色洗滌液洗滌1~2次,每次3~5分鐘。
(6)進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
注意事項(xiàng):
- 浸泡在抗原修復(fù)液(1×)中,*佳的加熱時(shí)間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行實(shí)驗(yàn)。
- 如果使用微波爐加熱,需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。
- 本產(chǎn)品*限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,
- 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
保存條件:
4℃保存,有效期一年。