TruSpectral全真光譜高靈敏度多通道成像

采用的光譜檢測技術(shù)的FV3000共聚焦顯微鏡的TruSpectral全真光譜檢測器將高靈敏度與光譜靈活性集于一體，可以檢測微弱的熒光團。

• 透光率是傳統(tǒng)光譜檢測技術(shù)的三倍

• 可獨立調(diào)整的通道能夠優(yōu)化每個熒光團的信號檢測

• λ掃描模式可對復(fù)雜重疊熒光信號進行準(zhǔn)確的光譜拆分

• 濾色片（VBF）模式可同時進行四通道圖像采集，在虛擬通道模式下最多可進行十六通道的熒光采集

從宏觀到微觀成像和超分辨率顯微鏡

FV3000顯微鏡的從宏觀到微觀工作流程提供了數(shù)據(jù)采集路線圖，讓您能夠在背景中查看數(shù)據(jù)并輕松定位感興趣區(qū)域進行高分辨率成像。

• 使用低倍率1.25倍或2倍物鏡快速拍攝整體標(biāo)本的大視場（FOV）圖像

• 在拼接圖像上找到感興趣的區(qū)域，然后利用奧林巴斯超高分辨率技術(shù)（FV-OSR）切換到更高放大倍率物鏡進行低至120納米的高分辨率共聚焦成像

• 通過TruSight圖像處理完成采集，并獲得可隨時發(fā)布的顯微圖像

半個冠狀小鼠腦片在顯微鏡下拍攝的圖，二抗標(biāo)記的是GFP（Alexa Fluor 488，綠色）、SV2（Alexa Fluor 565，紅色）、Homer（Alexa Fluor 647，藍色）。

樹突（Anti-GFP抗體 Alexa Fluor 488，綠色）和突觸標(biāo)記（SV2，Alexa Fluor 565，紅色）。利用cellSensCI反卷積功能處理的奧林巴斯超級分辨率圖像。測量獲得半波峰寬約為135nm。使用100X 1.35 NA硅油物鏡獲取的圖像。

混合掃描可實現(xiàn)高速成像以及更高的出圖率

FV3000混合掃描單元將兩套掃描振鏡合二為一，提升共焦成像功能。

• FV3000RS混合掃描單元利用常規(guī)掃描振鏡用于高精度掃描，同時有共振掃描振鏡對實時生理現(xiàn)象進行高速成像

• 使用共振掃描振鏡以大視場捕獲視頻速率的圖像，速度可從全視場FN 18的每秒30幀/秒，一實現(xiàn)每秒438幀/秒（fps）

• 使用共振掃描振鏡觀察諸如心臟跳動、血液流動或細胞鈣離子（Ca2 +）動態(tài)等快速現(xiàn)象

• 一鍵切換高精度的常規(guī)掃描振鏡和高速度的共振掃描振鏡

精確的時間序列成像

時間序列成像實驗需要對樣品進行持續(xù)聚焦以及低光毒性。

• 奧林巴斯的TruFocus模塊即便溫度變化或添加試劑也可確保在活細胞成像過程中保持在焦

• FV3000顯微鏡的高靈敏度檢測器所要求的激光功率大幅度降低，配合共振振鏡減少每個點的曝光時間，從而在減少更多光毒性的同時得到更精確的圖像數(shù)據(jù)

利用硅油物鏡進行深層組織觀察

硅油的折射率接近于活組織的折射率，因此能夠以小球差進行活組織內(nèi)部的深度高分辨率觀察。

• 折射率匹配提供了更準(zhǔn)確的聚焦，實現(xiàn)了大體積生物體的高還原度的三維重構(gòu)和高分辨率共聚焦成像

• 長工作距離可實現(xiàn)深層的顯微成像

• 實時查看數(shù)據(jù)，并使用3D重構(gòu)軟件輕松觀察結(jié)構(gòu)

TruSpectral全真光譜檢測

與上一代的光譜檢測單元相比， TruSpectral全真光譜檢測技術(shù)能夠呈現(xiàn)更為出色的結(jié)果。FV3000顯微鏡各通道均采用了將光譜檢測器的靈活性與基于濾色片的靈敏度相結(jié)合的TruSpectral全真光譜檢測技術(shù)。

TruSpectral全真光譜檢測技術(shù)的工作原理

基于高效率的技術(shù)體相位全息（VPH）透射光柵，TruSpectal全真光譜檢測技術(shù)配合可調(diào)狹縫可實現(xiàn)2nm的光譜檢測。

靈敏度和準(zhǔn)確性

與傳統(tǒng)光譜檢測單元相比， FV3000系列共聚焦顯微鏡均配備的TruSpectral全真光譜檢測技術(shù)實現(xiàn)更高的光通量。體相位全息透射光柵能夠以比反射光柵高三倍的透射效率來衍射光線。由此最終獲得出色的活組織和固定組織多色熒光顯微圖像。

更高的量子效率

FV3000顯微鏡的高靈敏度檢測器（HSD）讓您能夠采集到常規(guī)檢測器無法檢測到的微弱熒光信號。HSD單元采用兩個量子效率45％的GaAsP檢測器，并通過Pilter固體制冷技術(shù)在極低激發(fā)光下將圖像背景噪聲降低20％。HSD單元可配合FV3000系統(tǒng)實現(xiàn)四通道GaAsP成像。

多達十六通道光譜TruSpectral檢測

TruSpectral全真光譜檢測可在所有顯微鏡通道上獨立工作，因此能夠在多達四個通道上實現(xiàn)真正的多通道同時λ掃描。多通道λ模式有助于實現(xiàn)實時和實驗后處理光譜拆分由此獲得出色的光譜分離結(jié)果。在多達四個動態(tài)范圍的條件下，可單獨調(diào)節(jié)每個檢測器的靈敏度實現(xiàn)明亮和暗淡信號的分離。

原始信號

各通道的靈敏度調(diào)整

光譜拆分

光譜拆分

FV3000系統(tǒng)的光譜反卷積算法讓重疊光譜能夠基于來自λ序列圖像的光譜信息進行分離。在實時圖像采集和采集后處理過程中，可以通過拆分算法消除通道之間的熒光串?dāng)_，從而清晰分離多達16個熒光信號。

兩種掃描振鏡模塊

可在兩種掃描單元之間選擇：常規(guī)掃描振鏡（FV3000）或混合的常規(guī)/共振掃描振鏡（FV3000RS）。

• 利用常規(guī)掃描振鏡和奧林巴斯超分辨率技術(shù)（FV-OSR）以高信噪比獲得低至120納米分辨率的圖像

• 常規(guī)振鏡掃描單元可提供精準(zhǔn)的龍卷風(fēng)掃描模式和多點刺激功能，而且刺激與成像切換僅需100ms

• 混合式掃描單元既配有用于高精度掃描的常規(guī)掃描振鏡，也配有用于高速成像的共振掃描振鏡

• 共振掃描振鏡讓您能夠以512×512像素全視場每秒捕捉30幀圖像，或者通過剪切Y軸以每秒438幀速度捕獲關(guān)鍵的實時生物電生理現(xiàn)象，如鈣離子信號的檢測。

兼顧速度和視場數(shù)

很多高速掃描方法受制于成像視野，從而限制了檢查多細胞大視野的能力。FV3000RS顯微鏡的共振掃描振鏡即便在每秒30幀的視頻速率下也可能保持FN 18的全視場成像，可實現(xiàn)每秒438幀采樣。

循環(huán)平均化降噪處理

低激光功率高速掃描盡管可以大限度降低光毒性，但往往會降低信噪比，從而難以獲得高分辨率的時間序列圖像。通過循環(huán)平均化降噪處理，您不但可以調(diào)整快速延時圖像獲得更高的信噪比，同時還可保持時間分辨率并保留原始數(shù)據(jù)。

（左）以低激光功率（0.05％，488nm）采集的原始30 fps數(shù)據(jù)。
（右）以低激光功率采集的30 fps數(shù)據(jù)進行了循環(huán)平均化降噪處理（10幀）。

從宏觀到微觀的觀察

以從宏觀到微觀的觀察方式查看數(shù)據(jù)。使用FV3000系統(tǒng)經(jīng)過重新設(shè)計的光路，可生成低至1.25倍的詳細概覽圖像，然后即可輕松將所觀察的結(jié)構(gòu)以更高倍率成像。圖像拼接可以讓您采集相鄰視場的連續(xù)3D（XYZ）和4D（XYZT）圖像。從圖像采集到拼接的全過程可自動化，由此節(jié)省時間并生成更多重要數(shù)據(jù)。

TruSight反卷積：實現(xiàn)更高分辨率的圖像處理

利用TruSight反卷積消除模糊并獲得更清晰、更銳利的圖像。FV3000共焦顯微鏡的專用cellSens算法可通過一鍵點擊完成從采集到處理的無縫工作流程，并通過GPU處理更快地得到結(jié)果。

GATTA-SIM納米尺的圖像

左圖：原始共聚焦圖像/右圖：使用TruSight獲得的圖像

多達4通道同步的Olympus超高分辨率 技術(shù)（FV-OSR）

適用于共定位分析的奧林巴斯超分辨率成像模塊可以依次或同時以120納米的分辨率采集四個熒光信號，分辨率幾乎是傳統(tǒng)奧林巴斯共焦顯微鏡的兩倍。

• 不需要特殊的熒光團，并且可處理各種樣品

• 只需很少的培訓(xùn)即可輕松上手

• 為FV3000共焦顯微鏡系統(tǒng)添加FV-OSR即可獲得超分辨率顯微鏡

0.5AU共聚焦圖像

使用cellSens高級反卷積的0.5AU共聚焦圖像

奧林巴斯超分辨OSR圖像，可清晰區(qū)分點狀染色

ruFocus時間序列成像

TruFocus技術(shù)讓多點實驗和長時程成像更加穩(wěn)定可靠。TruFocus技術(shù)使用一種具有低光毒性的紅外激光（1類）識別樣品平面位置，并提供兩種模式保持聚焦。

• 一鍵自動聚焦（AF）模式可讓您設(shè)置多個聚焦位置，從而在多點實驗中實現(xiàn)高效的Z序列采集

• 連續(xù)鎖焦模式可保持相應(yīng)觀察平面精確聚焦，并避免由于溫度變化或添加試劑而導(dǎo)致的焦點漂移，因此成為時間序列定量實驗的理想選擇

• TruFocus可兼容包括空氣物鏡、塑料培養(yǎng)皿和硅油物鏡在內(nèi)的多種共聚焦實驗條件

使用X Line物鏡實現(xiàn)高性能顯微成像

X Line物鏡可提供寬范圍色差校正、均勻的圖像和更高的數(shù)值孔徑，由此提高FV3000共聚焦顯微鏡的成像質(zhì)量。

左：常規(guī)物鏡/右：X Line物鏡

利用硅油物鏡進行深層組織觀察

奧林巴斯提供四款高數(shù)值孔徑硅油浸物鏡，使活細胞成像獲得的效果。

• 硅油的折射率（ne≈1.40）接近于活組織的折射率（ne≈1.38），因此能夠以小球差進行深層的活組織內(nèi)部的高分辨率觀察。

• 硅油不會變干或硬化，因此在長時間觀察過程中無需重新加油

超級色差校準(zhǔn)物鏡（PLAPON60XOSC2）提高共定位分析的可靠性

這款油浸物鏡可大限度減少405-650nm光譜波段橫向和軸向色差，使您能夠獲取可靠的共定位圖像并進行超高定位精度的測量。物鏡對近紅外線區(qū)域達850nm波長進行色差校正，使之成為定量觀察成像的理想選擇。

• 倍率: 60X

• NA數(shù)值孔徑: 1.4（油浸）

• WD工作距離: 0.12毫米

• 色差校正范圍：405–650nm

• 為每個物鏡提供光學(xué)數(shù)據(jù)

PLAPON60XOSC2

針對電生理實驗的優(yōu)化配置

通過觸發(fā)信號I / O接口控制盒將共聚焦成像與電生理設(shè)備同步。I / O接口控制盒還可將電壓信號轉(zhuǎn)換為能夠以與熒光圖像相同方式進行處理的圖像?？奢p松實現(xiàn)在光刺激的同時利用共聚焦掃描記錄電壓信號圖像的功能。

直觀的軟件

FV3000軟件簡化了從采集到分析的整個共聚焦成像及分析工作流程?？啥ㄖ魄铱杀４娴牟季衷O(shè)置讓您無論復(fù)雜程度如何，均可輕松根據(jù)工作流程和實驗需求自定義界面。

實時3D渲染和分析

利用FV3000軟件的實時3D圖像渲染功能并實時查看您的數(shù)據(jù)。3D圖像可在圖像采集期間進行構(gòu)建并以實時圖像方式顯示。

選配NoviSight軟件可以執(zhí)行3D細胞分析。該軟件特別適合多孔多細胞球等標(biāo)本在3D范圍內(nèi)進行復(fù)雜的量化分析。

利用時序管理器簡化實驗復(fù)雜性

時序管理器軟件模塊可輕松處理復(fù)雜的科學(xué)實驗。多天時間序列實驗以微秒級掃描精度和毫秒級序列執(zhí)行精度進行控制?？蓤?zhí)行各種復(fù)雜實驗方案，其中包括：

• 在高低倍率物鏡之間切換

• 不同間隔的時間序列成像

• FRAP或FRET（受體漂白法）成像過程中進行光刺激

顯微圖像定量分析

FV3000共聚焦顯微鏡可增加一套可選配的分析功能來完成成像工作流程并提供定量數(shù)據(jù)。

• 計數(shù)和測量：計算細胞的數(shù)量、大小、光強和形態(tài)

• 共定位：分析重疊熒光光譜

計數(shù)和測量 共定位

FRET和FRAP實驗

FV3000顯微鏡與cellSens生命科學(xué)分析模塊配合使用，可輕松獲取及分析FRET和FRAP實驗。

• 在FRAP實驗中，τ/ 2和移動/靜止部分，可以通過擬合漂白后熒光恢復(fù)引起的亮度變化曲線來進行估算。

• FRET效率的測量可以通過受體漂白法、比例成像法和敏化發(fā)射法來實現(xiàn)。

左：原始CFP/YFP比值 右：CFP/YFP比值的IMD

目標(biāo)追蹤

使用cellSens目標(biāo)追蹤模塊自動檢測、追蹤和分析延時圖像中的運動對象。追蹤功能提供了強大直觀的工具來量化諸如細胞移動和分裂等動態(tài)過程。

遠程開發(fā)（RDK）模塊

遠程開發(fā)模塊可使用Python、C ++和Matlab等語言對特定FV3000顯微鏡功能進行遠程控制和編程。RDK模塊能夠發(fā)揮系統(tǒng)所蘊含的更大潛力，是具有編程經(jīng)驗用戶的強大工具。

技術(shù)參數(shù)