Scanlater Western Blot卡盒使在酶標(biāo)儀上進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡成像檢測成為可能
產(chǎn)品概述：
目前檢測轉(zhuǎn)印到 WB 膜上蛋白的技術(shù)眾多包括熒光標(biāo)記、銀染和化學(xué)發(fā)光法等；可是每一種技術(shù)都有其局限，人們一直致力于尋找提高 WBs 定量準(zhǔn)確度和動態(tài)檢測范圍的技術(shù)方法。這里介紹一種的在 SpectraMax i3X 或 Paradigm 多功能酶標(biāo)儀上檢測 WBs 膜的蛋白分析方法，Scanlater Western Blot 卡盒使在酶標(biāo)儀上進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡成像檢測成為可能。膜上使用銪元素-螯合物或標(biāo)記二抗特異結(jié)合被研究的蛋白。銪元素標(biāo)記具有長熒光壽命周期，可至1ms 級別，所以熒光的檢測采用時(shí)間分辨的模式，從而可以減少來自于自發(fā)熒光和其他短壽命周期的雜光的背景。WBs 膜被置于酶標(biāo)儀內(nèi)，然后使用 TRF 卡盒進(jìn)行 WBs 膜優(yōu)化掃描，此方法不涉及酶的檢測加之銪元素-螯合物標(biāo)記物具有很強(qiáng)的光漂白抗性，因而信號十分穩(wěn)定能至幾周到幾個(gè)月。這就允許對膜進(jìn)行重復(fù)掃描以及可能進(jìn)行不同條帶的強(qiáng)度對比以及根據(jù)標(biāo)品進(jìn)行更精確的定量。TRF 檢測方式采用單光子計(jì)數(shù)模式，所以理論的動態(tài)檢測范圍為>105；實(shí)際應(yīng)用中，動態(tài)檢測范圍則受限于高含量條帶的熒光飽和以及非特異性結(jié)合造成的背景因素。由于不使用CCD，所以此方法不會出現(xiàn)高光溢出現(xiàn)象，而這是化學(xué)發(fā)光和普通熒光檢測的常見問題，所以能夠提供非常銳利的條帶和出色的圖像質(zhì)量。這一新穎的多功能酶標(biāo)儀檢測平臺上的 Scanlater Western Blot 檢測系統(tǒng)以其操作簡便、檢測靈敏和信號的超高穩(wěn)定性，提供了出色的 WBs 檢測性能表現(xiàn)，必將多功能酶標(biāo)儀在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用方面帶來又一重大突破！
主要特點(diǎn)：
1.靈敏度：能夠檢測超低含量的人類細(xì)胞當(dāng)中的內(nèi)源性的磷酸化和泛素化的蛋白
2.背景消除：銪元素時(shí)間分辨熒光標(biāo)記，具有超長熒光壽命，至1ms級，使用TRF檢測模式能夠極大地降低自發(fā)熒光和其他來源的背景噪聲
3.節(jié)省時(shí)間：無需進(jìn)行ECL般的耗時(shí)優(yōu)化過程
4.降低成本：不再需要成本高昂的X-射線膠片和顯影劑
5.即插即用：可隨時(shí)在 SpectraMax® i3X 或 SpectraMax Paradigm 多功能酶標(biāo)儀上進(jìn)行高性能 WB 檢測，極大地?cái)U(kuò)展了其在實(shí)驗(yàn)室研究方面的應(yīng)用
應(yīng)用領(lǐng)域：
Western Blot 檢測、蛋白表達(dá)、豐度、修飾檢測、條帶灰度分析等。
實(shí)驗(yàn)舉例：
基于 Scanlter 卡盒全面探索細(xì)胞熱應(yīng)激反應(yīng)：正常細(xì)胞長時(shí)間暴露在高溫環(huán)境下會引起細(xì)胞凋亡，同樣也會提高細(xì)胞 HSP70（Heat Shock Protein）的表達(dá)量。在一款微孔板檢測平臺 i3x 中同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞增殖的成像分析和 HSP-70 蛋白量檢測等，通過多種方式檢測細(xì)胞功能，如細(xì)胞熱激反應(yīng)
