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吖啶酯（NSP-SA-NHS）CAS：199293-83-9和相關(guān)化合物已被證明是非常有優(yōu)勢的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，穩(wěn)定性，活性和敏感性超過了那些放射性同位素。在堿性條件下，NHS將會離去，吖啶酯將會以一個穩(wěn)定的酰胺鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合形成吖啶化合物。反應(yīng)完成后，多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在存在堿性過氧化氫，吖啶標(biāo)記的蛋白不需要酶催化可自行發(fā)光。加入激發(fā)試劑后，體系立即釋放光子，可以用430nm標(biāo)準(zhǔn)光度計檢測。這個發(fā)光過程是十分短暫（整個過程的發(fā)生小于2秒），觸發(fā)方案必須增加內(nèi)部光度計和光子探測器。蛋白質(zhì)，多肽，抗體，核酸都可以用吖啶標(biāo)記。標(biāo)記化合物在堿性過氧化氫的激發(fā)下快速發(fā)光，通過收集光子可以檢測到標(biāo)記化合物。
產(chǎn)品穩(wěn)定性：
在酸性溶液中(pH<4.8)都很穩(wěn)定，與蛋白質(zhì)偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低，凍干品在-20℃下，可以保存一年以上。
當(dāng)pH>4.8，尤其在堿性溶液中，吖啶化合物由于部分發(fā)生水解降低了其穩(wěn)定性，水解過程為不發(fā)光的暗反應(yīng)過程；水解程度隨pH增大而增大，隨溫度的升高而增大。
吖啶酰胺穩(wěn)定性較高于吖啶酯結(jié)構(gòu)，抗水解能力較強。
吖啶環(huán)或酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上連有甲基等給電基團(tuán)，由于空間位阻大，熱穩(wěn)定性增加；連有吸電子基團(tuán)，有利于親核取代反應(yīng)而使其穩(wěn)定性下降。
建議：偶聯(lián)后保存用的緩沖液盡量用弱酸性的緩沖液，鼓氮氣除去其中的氧氣。密封避光低溫保存。有條件的可以制成凍干樣再保存。
注意事項：
吖啶酯除了DMF，也可以用無水DMSO等非質(zhì)子性溶劑來溶解。通常吖啶酯用DMF較高溶解的濃度為4mM (約2.7mg/ml)，我司生產(chǎn)的吖啶酯中DMSO中溶解度可達(dá)10mg/ml。
標(biāo)記前，由于吖啶酯末端羧基經(jīng)NHS活化，較為活潑，請用非質(zhì)子性的干燥無水溶劑來溶解；標(biāo)記后，標(biāo)記后吖啶酯與被標(biāo)記物之間以酰胺鍵或者酯鍵等形式存在，酸性溶劑基本沒有影響；吖啶酯本身活性位點在堿性和氧化環(huán)境下不穩(wěn)定，因此應(yīng)根據(jù)被標(biāo)記物的穩(wěn)定性配制相應(yīng)的非強堿性非氧化的體系中處理和保存。
發(fā)光標(biāo)記物在光照條件下有可能部分分解，以致影響發(fā)光效果。吖啶酯的實驗操作和儲存建議避光條件下處理，目前暫時沒有具體的研究數(shù)據(jù)。
吖啶酯標(biāo)記蛋白等大分子化合物建議用G25脫鹽柱分離；吖啶酯標(biāo)記小分子化合物建議用柱層析分離；
吖啶酯發(fā)光過程是十分短暫（整個過程的發(fā)生小于2秒），觸發(fā)方案必須增加內(nèi)部光度計和光子探測器；另外，本產(chǎn)品也可以使用配備自動進(jìn)樣器的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行發(fā)光數(shù)據(jù)采集，較大限度降低加樣時間對采集信號的影響。
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