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熒光分光光度計基本結構及特點

   2017年03月14日 17:26  
  【中國儀器網(wǎng) 產(chǎn)品文庫】熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光壽命、熒光偏振、熒光強度、量子產(chǎn)率等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關系。
 


 

  熒光分光光度計基本結構
 
  1. 光源:
 
  為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在300nm~400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等,故較常用。
 
  2.檢測器:
 
  一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉為電信號。
 
  3. 樣品室:
 
  通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。
 
  4.發(fā)射單色器:
 
  置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
 
  5.激發(fā)單色器:
 
  置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或*單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
 
  熒光分析的特點:
 
  1.高靈敏度:熒光分析的靈敏度比分光光度計法大 2 ~ 3 個數(shù)量級。 分光光度法通常在 10-7 級 ,而熒光的靈敏度達10-9。
 
  2.強選擇性:熒光物質(zhì)具有2種特征光譜:激發(fā)光譜和吸收光譜,分光光度法通過測定物質(zhì)的吸收光譜來分析,而熒光可根據(jù)激發(fā)光譜和發(fā)射光譜來鑒定物質(zhì)。
 
  3.信息量豐富:能提供熒光物質(zhì)的多種參數(shù)。
 
  4.不足之處:①很多物質(zhì)本身不發(fā)熒光;②熒光的產(chǎn)生與化合物結構的關系不明確;③干擾因素多,光分解、氧淬滅、易污染。
 
  熒光分析的常用方法:
 
  1.直接測定法:利用物質(zhì)本身發(fā)出的熒光來進行測定。因為大部分物質(zhì)不發(fā)熒光,該法少用。
 
  2.間接測定法:物質(zhì)本身不發(fā)熒光,跟熒光探劑結合后轉變成熒光物質(zhì)進行測定。
 
  3. 熒光探針探劑的條件:⑴ 探劑與被測物質(zhì)分子的某一微區(qū)必須有特異性結合且牢固;
 
 ?、?探劑的熒光必須對環(huán)境條件靈敏;
 
 ?、?結合的探劑不會影響被測物質(zhì)的分子結構和特性;
 
 ?、?能利用熒光淬滅和光分解等對熒光進行有效定量和定性分析。

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