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【儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】暗視場(chǎng)顯微鏡：使用特殊的暗視場(chǎng)聚光鏡使照明光線偏移而不進(jìn)入物鏡，只有樣品的散射光進(jìn)入物鏡。
注意事項(xiàng)
1、制作暗視場(chǎng)光擋時(shí)，若光擋直徑過(guò)小或光擋的中心位置不正，則不能全部擋掉直射光，視野不暗，樣品與背景的明暗反差不明顯;若光擋直徑過(guò)大，聚焦到樣品上的光線不足，使暗視野顯微鏡觀察到的樣品亮度不佳，影響觀察效果。
2、使用暗視野顯微鏡時(shí)，照明光源的照明強(qiáng)度要高，否則樣品的反射光強(qiáng)度不夠，影響觀察效果。
3、若視場(chǎng)中樣品與背景明暗反差不強(qiáng)時(shí)，可以上下調(diào)節(jié)聚光器的位置，使視場(chǎng)內(nèi)的反差提高。
4、要求使用的載玻片和蓋玻片必須無(wú)劃痕且無(wú)灰塵，物鏡前透鏡也必須清潔無(wú)塵。載玻片與蓋玻片的厚度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。載玻片太厚，聚光器的焦點(diǎn)將落在載玻片內(nèi)，達(dá)不到被檢物體的平面上;使用油鏡頭時(shí)，由于物鏡的工作距離很短，甚至無(wú)法調(diào)焦，從而看不到或看不清被檢物體。
5、載玻片的厚度要適宜，照明光束經(jīng)暗視野顯微鏡聚光器后，產(chǎn)生空心照明光錐，即中心為暗區(qū)。而反射光的焦點(diǎn)在聚光器上透鏡表面之上，很短的距離。因此，載玻片的適宜厚度為0.8～1.2mm。
6、物鏡的數(shù)值孔徑必須小于聚光器的數(shù)值孔徑，否則會(huì)因物鏡的孔徑角大于暗視野顯微鏡聚光器所形成的照明光束中心暗區(qū)的角度，致使部分照明光線射入物鏡，破壞或降低了暗視場(chǎng)的照明。
7、暗視野顯微鏡鏡檢時(shí)室內(nèi)要暗，如果沒有這樣的條件，應(yīng)盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周圍的光線射入。
8、在進(jìn)行油鏡鏡檢時(shí)，由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡的漫反射，會(huì)妨礙暗視野顯微鏡鏡檢效果，所以要求盡可能地除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡。
工作原理
暗視場(chǎng)顯微鏡在構(gòu)造上應(yīng)用丁達(dá)爾現(xiàn)象（Tyndall phenomenon:當(dāng)聚光光束射入溶膠時(shí)，從光束的側(cè)面可以看到一條發(fā)亮的光柱，在光的傳播過(guò)程中，光線照射到粒子時(shí)，如粒子直徑略小于入射光波長(zhǎng)，則發(fā)生光的散射，每個(gè)微粒就成為一個(gè)發(fā)光點(diǎn)，從側(cè)面可以看到一條光柱。），裝配了一類特殊聚光器——暗視場(chǎng)聚光器，使入射光束，從聚光器斜向照明被檢樣品。由于照明光線與顯微鏡光軸形成較大的角度通過(guò)物場(chǎng)，或因聚光器的特殊構(gòu)造，照明光線在聚光器頂透鏡或蓋片的上表面發(fā)生全反射，致使照明光線不能入射物鏡之內(nèi)。但是，樣品被照明并發(fā)出反射光。鏡檢時(shí)，因不能直接觀察到照明光線，與光軸垂直的平面視場(chǎng)暗黑，在深暗的背景上能清晰地看到由散射光和反射光形成的明亮的物體影像，物像與背景造成很大的反差。視場(chǎng)內(nèi)的樣品，被斜射光線照明，可從樣品各種結(jié)構(gòu)表面散射和反射光線，看到許多細(xì)胞器的明亮輪廓，諸如細(xì)胞核、線粒體、液泡以及某些內(nèi)含物等。如果是正在分裂的細(xì)胞，其各類紡錘絲和染色體亦可窺見。
暗視場(chǎng)顯微鏡是利用樣品的散射光和反射光進(jìn)行觀察，所以只能看到物體的存在與運(yùn)動(dòng)而不能辨清其微細(xì)結(jié)構(gòu)。暗視場(chǎng)顯微鏡的檢測(cè)能力，取決于入射光的強(qiáng)度和視場(chǎng)的反差，后者又隨微粒及其背景的折射率差別的加大而增加。
暗視場(chǎng)顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的區(qū)別，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有別。確切地說(shuō)，稱暗視場(chǎng)顯微鏡為暗視場(chǎng)照明更為貼切。暗視場(chǎng)照明是斜向照明的一種，這種照明法能提高對(duì)微小物體的分辨能力，對(duì)大小在0.004μm以上的微小粒子，盡管看不清楚其結(jié)構(gòu)，亦可清晰地分辨其存在和運(yùn)動(dòng)。
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