基因編輯技術(shù)是指能夠?qū)δ繕?biāo)基因進(jìn)行定點(diǎn)“編輯”,例如片段插入、缺失,堿基定點(diǎn)編輯等,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定DNA|片段的修飾。
基因編輯工具
目前的基因編輯工具主要有鋅指核酸酶(ZFN)、轉(zhuǎn)錄因子激活樣效應(yīng)物核酸酶(TALEN)和規(guī)律間隔成簇短回文重復(fù)序列(CRISPR/Cas)等技術(shù)。CRISPR/Cas系統(tǒng)由于其精準(zhǔn)、簡單、快速、成本低的特點(diǎn),成為目前基因編輯使用較為廣泛的技術(shù)。
以CRISPR系統(tǒng)為例,在使用CRISPR/Cas系統(tǒng)進(jìn)行基因編輯過程中,需要gRNA來引導(dǎo)Cas蛋白對(duì)基因組進(jìn)行切割,然后再通過供體兩端的同源片段進(jìn)行同源重組,或利用生物體自身的非同源末端連接進(jìn)行修復(fù)。
CRISPR/CAS基因編輯技術(shù)
基因編輯流程
無論使用哪種工具進(jìn)行基因編輯,都需要構(gòu)建載體,將基因編輯工具導(dǎo)入到細(xì)胞中,然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證,篩選出被正確編輯的細(xì)胞。
以酵母細(xì)胞基因編輯為例:
構(gòu)建載體過程包含了基因合成或擴(kuò)增、基因組裝、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、大腸桿菌培養(yǎng)、質(zhì)粒驗(yàn)證、測序等步驟。然后將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞中,其中包含酵母轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、克隆驗(yàn)證等步驟。
基因編輯流程長、步驟多、需要熟練的操作,耗費(fèi)了科研工作者大量的時(shí)間和精力,往往是抬頭看文獻(xiàn)、低頭做實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)虐我千百遍,我待實(shí)驗(yàn)如初戀。
如果可以將基因編輯使用的質(zhì)粒像工業(yè)化生產(chǎn)線上的產(chǎn)品一樣自動(dòng)化生產(chǎn),輸入不同的基因片段,產(chǎn)出相應(yīng)的質(zhì)粒,然后再將其轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯,將極大的提高科研以及研發(fā)效率,并且可以使科研人員從實(shí)驗(yàn)中解放出來,專注于實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析。
自動(dòng)化基因編輯
基因編輯自動(dòng)化流水線需要完成基因擴(kuò)增、組裝、大腸桿菌轉(zhuǎn)化、克隆驗(yàn)證、質(zhì)粒提取、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、宿主驗(yàn)證等多種實(shí)驗(yàn)操作,其中涉及多種儀器設(shè)備,如自動(dòng)化液體工作站、酶標(biāo)儀、克隆挑選機(jī)器人、培養(yǎng)箱、PCR儀、離心機(jī)、封膜機(jī)、撕膜機(jī)等。同時(shí),需要一款強(qiáng)大的整合軟件,進(jìn)行儀器調(diào)度、資源分配、耗材統(tǒng)籌、數(shù)據(jù)管理,使實(shí)驗(yàn)過程更加的流暢。
Beckman Coulter自1986年生產(chǎn)*Biomek 1000自動(dòng)化液體工作站開始,至今已有30余年時(shí)間,期間不斷開發(fā)、創(chuàng)新,提升產(chǎn)品力,并擁有專業(yè)的整合部門,為客戶提供個(gè)性化的整合方案。
Beckman產(chǎn)品發(fā)布時(shí)間軸
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基因編輯自動(dòng)化系統(tǒng)示例
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