【儀器網(wǎng) 解決方案】毛細(xì)管電泳儀的主要部件包括直流高壓電源、毛細(xì)管、電極和電極槽、沖洗進(jìn)樣系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等。之前我們已經(jīng)介紹了造成毛細(xì)管電泳儀電流不穩(wěn)定、基線不穩(wěn)定以及分離效率差的原因以及解決方法,但是在毛細(xì)管電泳儀的實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中,遷移時(shí)間重現(xiàn)性差和峰面積重現(xiàn)性差也是比較常見(jiàn)的故障。
四、遷移時(shí)間重現(xiàn)性差
1、樣品吸附到毛細(xì)管壁
緩沖液導(dǎo)致的EOF變化(特別是磷酸鹽和表面活性劑)或樣品吸附,老化毛細(xì)管并要有足夠的平衡時(shí)間,更換毛細(xì)管。
2、管壁電荷滯后
在高(或低)的PH條件下老化毛細(xì)管和使用低(或高)PH運(yùn)行緩沖液引起,避免PH差異且要有足夠的平衡時(shí)間。
3、緩沖液組分變化
(1)電解導(dǎo)致的PH變化,更新緩沖液。
(2)緩沖液揮發(fā),扣緊緩沖液瓶蓋和降低樣品盤溫度。
(3)再生溶液廢液流進(jìn)了出口緩沖液,使用單獨(dú)的樣品瓶收集廢液。
(4)再生溶液遺留在緩中液瓶中,先將毛細(xì)管插入單獨(dú)的緩)中液瓶或水瓶中。
4、緩沖液瓶液面不一致
生成層流,使緩沖液瓶液面一致。如果不更新緩沖液,就不要使用入口瓶沖洗毛細(xì)管。
5、不同批次毛細(xì)管的硅羥基含量不同
內(nèi)壁電荷差異和EOF波動(dòng),測(cè)定EOF并歸一化。
6、溫度變化
粘度和EOF變化,使用可控溫的毛細(xì)管的系統(tǒng)。
五、峰面積重現(xiàn)性差
1、樣品記憶效應(yīng)
外部進(jìn)樣,使用進(jìn)樣端平整光滑的毛細(xì)管除去毛細(xì)管端口外面的聚酰亞胺涂層
2、簡(jiǎn)單地將毛細(xì)管伸進(jìn)樣品中引起的零進(jìn)樣
外部進(jìn)樣,不能*消除,增大進(jìn)樣量以消除該效應(yīng)。
3、樣品吸附到毛細(xì)管壁
峰形變差(拖尾)未洗脫樣品,改變緩沖液的PH,增大緩沖液濃度使用添加劑比如纖維素或者涂層毛細(xì)管。
4、信噪比低
積分誤差,優(yōu)化積分參數(shù),增大樣品濃度,使用峰高。
5、毛細(xì)管環(huán)境的溫度變化
粘度和進(jìn)樣量的變化,使用可控溫的毛細(xì)管的系統(tǒng)。
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